产品目录

CAS号：9001-78-9
保存：-20℃

Biorab的碱性磷酸酶来源于牛肠粘膜。
牛肠碱性磷酸酶为二聚膜衍生糖蛋白。至少存在三种同工酶，每个单体通常拥有两个N-连接多糖和一个或多个O-连接多糖。该酶需要锌以及镁或钙二价离子才能显示活性。
单位定义：在pH9.8,37℃条件下，一个DEA单位可每分钟水解1 μmole的4-硝基苯基磷酸酯。(一个甘氨酸单位相当于~3个DEA单位)。
应用：碱性磷酸酶可用于酪蛋白和其他蛋白质的去磷酸化。碱性磷酸酶还可用于DNA或RNA的5′-末端的去磷酸化，以防止自我连接。经碱性磷酸酶的去磷酸化作用后，DNA或RNA还可被放射性标记磷酸盐标记(通过T4多核苷酸激酶)。
高浓度的酶稳定性更高。Biorab的碱性磷酸酶以高浓度母液形式提供，并附赠稀释液(含Mg²⁺，Zn2+，甘油等)和10×反应缓冲液。
产品组成：
使用方法(以之为例)：
1.在微量离心管中配制50μL反应体系：
(DNA Fragment 1~20pmol；10×反应液5μL；碱性磷酸酶30U；补水到50μL)
2.37℃或50℃反应30分钟。或者先37℃反应15分钟，再50℃反应15分钟。注意：单链DNA和具有5’突出末端的DNA在较低温度下(如37℃)即可去磷酸化，而具有3’突出末端的DNA或平末端DNA需要较高温度(如50℃)才能去磷酸化。
3.苯酚/氯仿/异戊醇(25：24：1)抽提2次。注意：如果早在苯酚抽提之前，用自备的蛋白酶K降解CIAP酶，则效果更好。具体做法是：加入EDTA和SDS使其终浓度为5mM EDTA和0.5% SDS，最后加入蛋白酶K溶液，使其终浓度为50μg/mL，然后56℃处理30分钟，再75℃孵育10分钟。然后用于苯酚/氯仿/异戊醇抽提。
4.氯仿/异戊醇(24：1)抽提1次。
5.添加2.5μL的3M NaCl(终浓度150mM)。
6.添加125μL的(2.5倍量)冷乙醇，在-20℃下放置30～60分钟。
7.13000g离心20分钟后，小心去上清。
8.用1mL 75%乙醇洗涤一次。
9.干甩数秒，小心吸弃上清。
10.用20μL以下的TE Buffer溶解DNA沉淀待用或放-20℃长期放置。
相关搜索：碱性磷酸酶，Phophatase Alkaline,Calf Intestine(CIPA)，9001-78-9